BRL細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞傳代技術(shù)

一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代 
1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

二、懸浮細(xì)胞的傳代 
1、直接傳代
① 讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
① 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm，5分鐘。
② 去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。
③ 將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

牙髄細(xì)胞的傳代

牙髄細(xì)胞中主要是成纖維細(xì)胞，貼壁生長。

傳代方法：

棄培養(yǎng)液（盡量吸干）

加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使消化液浸過有細(xì)胞的瓶壁

重復(fù)4～5次

迅速吸去消化液

鏡下觀察細(xì)胞變圓回縮（約1分鐘）

加入*培養(yǎng)液（DMEM+10% FCS）終止反應(yīng)

吹打后，1:2接種，繼續(xù)培養(yǎng)。

大鼠系膜細(xì)胞傳代

我用的是DMEM低糖培養(yǎng)液，每次傳代前，將培養(yǎng)液，PBS，0.25％的胰酶（沒加edta）,放37度烤箱預(yù)熱（此做法是減少4度的涼液體對細(xì)胞的刺激，以防細(xì)胞死亡）。

每次換液時，一定要燒培養(yǎng)瓶口，做好無菌觀念。

先拋棄舊液，用PBS先沖凈殘留的血清，再加PBS用滴管輕輕的吹打細(xì)胞，將死細(xì)胞吹打掉。

加胰酶時注意：若用加edta的，記住了，在鏡下看到細(xì)胞在收縮時，趕快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑制胰酶的活性，但對edta無效。前后大概不到10秒。若用沒有加edta的，時間要適當(dāng)延長，看到細(xì)胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時，加血清，輕輕拍打，細(xì)胞就會散開。若團塊大，可用滴管吹打。

動作一點要快，不能讓細(xì)胞離開培養(yǎng)箱時間太長。

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C26小鼠結(jié)腸癌

C2C12小鼠成肌細(xì)胞

C-33 A人子宮頸癌

C3H小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

C6大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞

Ca Ski人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細(xì)胞

Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

CaKi-1人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

CaKi-2人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

CAL-27人舌鱗癌細(xì)胞

Calu-1人肺癌細(xì)胞

Calu-3人肺腺癌 (胸水)

Calu-6人退行性癌細(xì)胞

CaOV3人卵巢癌細(xì)胞

Capan1人胰腺癌細(xì)胞

Capan2人胰腺癌細(xì)胞

CaSki人宮頸腸轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞

CBRH-7919大鼠肝癌細(xì)胞

CCD-1095Sk人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞

CCRF-CEM人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞

CEM/C1人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞

Chang liver人張氏肝細(xì)胞

CHL倉鼠肺細(xì)胞

CHO中國倉鼠卵巢細(xì)胞

CHO/dhFr倉鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷

CHO-K1倉鼠卵巢細(xì)胞亞株

CL1人前列腺癌

CCRF-CEM人鼻咽癌細(xì)胞

CNE-2人鼻咽癌細(xì)胞

COLO 205人結(jié)腸癌細(xì)胞

COLO 320DM人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

COLO-704人卵巢癌細(xì)胞

COLO720E人卵巢癌細(xì)胞

COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞

COS-7非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞

COV362人卵巢癌細(xì)胞

COV434人卵巢癌細(xì)胞

COV504人卵巢癌細(xì)胞

COV644人卵巢癌細(xì)胞

CRFK貓腎細(xì)胞

CRL-9444人膜間皮細(xì)胞

CT-26小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

CTLA4 Ig-24中國倉鼠卵巢細(xì)胞

CTLL-2細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞

CV-1 非洲綠猴腎細(xì)胞

CW-2人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

D407人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞

D6人肺腺癌

Dami人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞

Daudi人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞

DC2.4小鼠樹突狀細(xì)胞

DH82狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞

DLD-1人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞

DU145人前列腺癌

EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞

EBTr (NBL-4)牛胚氣管細(xì)胞

EC18人食管癌細(xì)胞

EC-9706人食管癌細(xì)胞

ECA小鼠艾氏腹水瘤細(xì)胞

ECA-109人食管癌細(xì)胞

ECV304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

ED-25人肝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

EFO-21人卵巢癌細(xì)胞

EFO-27人卵巢癌細(xì)胞

EJ人膀胱癌細(xì)胞

EOMA小鼠血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞

ES-2人卵巢透明細(xì)胞癌

F81貓腎細(xì)胞

F9小鼠畸胎瘤細(xì)胞

FaDu人咽鱗癌細(xì)胞

FO小鼠骨髓瘤細(xì)胞

FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞

GBC-SD人膽囊癌細(xì)胞

GES-1人胃黏膜上皮細(xì)胞

GLC82人低分化肺腺癌細(xì)胞

GRC-1人腎癌細(xì)胞

H128人小細(xì)胞肺癌

H1299人非小細(xì)胞肺癌

H22小鼠肝癌細(xì)胞

H292人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)

H460人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

H466人小細(xì)胞肺癌

H69人小細(xì)胞肺癌

H9c2(2-1)大鼠心肌細(xì)胞

Hacat人正常皮膚細(xì)胞

HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞

HBZY-1大鼠腎小球系膜細(xì)胞

HCC94人子宮鱗癌細(xì)胞（高分化）

HCC1937人乳腺癌細(xì)胞

HCC827人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

HCCC-9810人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞

HCCLM3人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

HCCLMS人肝轉(zhuǎn)移癌

Hce-8693人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化）

HCE-8962人盲腸未分化癌

HCT 116人結(jié)腸癌細(xì)胞

HCT-15人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

HCT-8人回盲腸腺癌細(xì)胞

HEB人腦膠質(zhì)細(xì)胞株

HEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

HEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

HEEC人食道上皮細(xì)胞

HEK293-L人胚腎細(xì)胞

HEK293-T人胚腎細(xì)胞

HEL人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞

HELA人宮頸癌細(xì)胞

HeLa 229人宮頸癌細(xì)胞

hep 3B人肝癌細(xì)胞

Hep 3B2.1-7人肝癌細(xì)胞

Hep-2喉表皮樣癌

Hep3B人肝癌

Hepa 1-6小鼠肝癌細(xì)胞

Hep G2人肝癌細(xì)胞

HepG2.2.15人肝癌細(xì)胞

HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞

hFOB 1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞

HGC-27人胃癌細(xì)胞（未分化）

HHVEC肝瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞

HIC人小腸癌細(xì)胞

HK-2人腎小管上皮細(xì)胞

HKF人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞

HL60急髓白血病細(xì)胞

HLamp人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞

HLEC人晶狀體上皮細(xì)胞

HLF人胚肺

HMy2.CIR人B淋巴母細(xì)胞

HNE-1人鼻咽癌細(xì)胞

HNE-2人鼻咽癌細(xì)胞

HO-8910人卵巢癌

HONE-1人鼻咽癌細(xì)胞

HPAC人胰腺癌細(xì)胞

Hs 578T人乳腺癌細(xì)胞

Hs766T人胰腺癌細(xì)胞