成人观看视频-成人观看网站a-成人国产mv免费视频-成人国产第一区在线观看-成人国产激情福利久久精品-成人国产精品

服務(wù)熱線:
15821734033
產(chǎn)品目錄/ PRODUCT MENU
新聞資訊

您現(xiàn)在的位置:首頁  >  新聞資訊  >  細胞如何復(fù)蘇及凍存

細胞如何復(fù)蘇及凍存

發(fā)布時間:2012-08-21瀏覽:4380次

細胞如何復(fù)蘇及凍存

 

一.問: 細胞如何復(fù)蘇與培養(yǎng)?

 答:將液氮或- 80℃ 保存的腫瘤細胞于 37℃ 水浴,快速溶化,用 8.0ml 培養(yǎng)基混勻已融化的腫瘤細胞懸液,于 1500 轉(zhuǎn)/ 分,離心 3 分鐘。 棄上清,再吸取 8.0ml 培養(yǎng)基質(zhì)混勻細胞沉淀,再 1500 轉(zhuǎn)/ 分,離心 3 分鐘,棄上清,細胞沉淀用 1.0ml 培養(yǎng)基混勻,備用。 另取一個 75cm2 方瓶,加入 14.0ml 培養(yǎng)基質(zhì),將上述制備的含 腫瘤細胞懸液(1.0ml)加入此方瓶中,于 37℃,5%CO2 孵育箱中培養(yǎng)。

 若此腫瘤細胞懸浮生長,大約 3-4 天細胞基質(zhì)會變黃,5.0ml 細胞懸液可傳代一個方瓶培養(yǎng),可用 3-4 個方瓶培養(yǎng),一個方瓶中呈對數(shù)生長的腫瘤細胞可達 1-1.5×107 個,根據(jù)試驗所需,可決定傳代的次數(shù)。 若此腫瘤細胞呈貼壁生 長,經(jīng)過 3-4 天,腫瘤細胞生長至 80%-95% 單層時,棄上清,用 0.5mM 的EDTA(難消化的腫瘤細胞用0.25%胰酶1.0ml),處理腫瘤細胞大約 3-5 分鐘,用倒置顯微鏡觀察,當(dāng) 90% 的腫瘤細胞變圓時,即可用彎管吹打并將消化的細胞轉(zhuǎn)移到 15ml 離心管中,于 1500 轉(zhuǎn)/ 分下,離心 3 分鐘,棄上清,加少許培養(yǎng)基混勻,可傳代 3 個 75cm2 方瓶擴大培養(yǎng)。

 

二. 問:細胞如何凍存

 答:將對數(shù)生長的腫瘤細胞用 1 個 75cm2  方瓶按上述方法收集,于 1500 轉(zhuǎn)/分離心 3 分鐘,棄上清,用保種液( 含 10% DMSO 的小牛血清)3.0ml 混勻,分別加入到 2-3 只保種管中,寫上腫瘤細胞名稱、時間、保種者姓名,放- 80℃ 保存,次日將它們轉(zhuǎn)移到液氮中保存( 注: -80℃  下可保存細胞半年至一年,液氮可保存細 胞 5-10 年,甚至更長的時間)。以上所有物品均需經(jīng)過高溫滅菌 ( 121℃,30 分鐘) ,培養(yǎng)基質(zhì)則經(jīng)過過濾(0.22uM)除菌,所有操作均必須遵守?zé)o菌操作技術(shù),避免細菌、真菌、病原體、衣原體等污染。

上海慧穎生物科技有限公司 版權(quán)所有    備案號:滬ICP備12016933號-2

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    管理登陸    網(wǎng)站地圖

聯(lián)系電話:
15821734033

微信服務(wù)號

主站蜘蛛池模板: 日本午夜在线观看免费视频 | 91精品自在拍精选久久 | 午夜激情视频专区在线观看网站大全 | 久久国产成人精品国产成人亚洲 | 久久免费视频播放 | 久久婷婷综合五月一区二区 | 免费视频观看在线www日本 | 公开免费视频 | 狠狠色狠狠色综合人人 | 天天干天天干天天干天天干天天干 | 成年人在线免费观看视频网站 | 精品国产专区91在线尤物 | 亚洲精品美女国产一区 | 精品一区二区三区三区 | 亚洲伊人精品 | 91精品视频网站 | 亚洲国产精品久久精品成人 | 久久精品国产亚洲高清 | 久久久久夜夜夜精品国产 | 婷婷草| 国产成人精品免费视频大全麻豆 | 日本h网站 | 中文字幕亚洲一区二区三区 | 天天碰天天干 | 人人爽天天碰天天躁夜夜躁 | 草b视频在线观看 | 天天看夜夜看 | 中文字幕在线观看网站 | 水户香奈在线观看 | 日日操免费视频 | 国产丰满眼镜女在线观看 | 久久96精品国产 | 亚洲欧洲视频在线观看 | 99婷婷久久精品国产一区二区 | 亚洲香蕉综合在人在线时看 | 久久99精品久久久久久牛牛影视 | 国产精品1区2区 | 在线欧美日韩精品一区二区 | 中文字幕日韩在线 | 亚洲欧美一级夜夜爽w | 伊人久久综合视频 |