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無外泌體血清 梅約診所如何開展exosome研究

發(fā)布時(shí)間:2016-08-04瀏覽:2588次

exosome如今是個(gè)熱門的話題。這種直徑約為30-150 nm的小囊泡天然存在于所有體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特異,因此,exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。如何開展exosome的研究?我想這是大家都感興趣的。那就讓我們來看看的梅約診所(Mayo Clinic)是怎樣做的。

exosome如今是個(gè)熱門的話題。這種直徑約為30-150 nm的小囊泡天然存在于所有體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特異,因此,exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。如何開展exosome的研究?我想這是大家都感興趣的。那就讓我們來看看的梅約診所(Mayo Clinic)是怎樣做的。

 

梅約診所的Gregory Gores博士主要開展肝臟疾病的基礎(chǔ)研究。他所感興趣的領(lǐng)域之一是脂毒性及其在非酒精性脂肪性肝病發(fā)展中的作用。研究小組提出假說,認(rèn)為脂毒性誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞釋放囊泡(exosome和小囊泡)。他們推測(cè),這些細(xì)胞外囊泡參與了免疫細(xì)胞的招募和激活,導(dǎo)致肝臟炎癥。

 

Gores博士的小組需要測(cè)定樣品中細(xì)胞外囊泡的大小分布和數(shù)量。之前,他們使用掃描電鏡來觀察和測(cè)定顆粒大小,并通過吸光度來測(cè)定蛋白含量,但發(fā)現(xiàn)這種方法不大準(zhǔn)確。于是,他們選擇了NanoSight的納米顆粒追蹤分析(NTA)技術(shù)。有了這一技術(shù),他們能夠在分離后立即分析囊泡,并在同一天內(nèi)將濃度的囊泡用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

 

在實(shí)驗(yàn)過程中,他們使用的是NS300納米顆粒分析儀。此款儀器能夠測(cè)定大小在10-2000 nm的懸浮顆粒,滿足廣泛的應(yīng)用需求,包括蛋白聚集、exosome和囊泡研究、藥物運(yùn)輸,也特別適合以熒光量子點(diǎn)標(biāo)記的顆粒分析。

 

這個(gè)款的NanoSight儀器提供了多方面的分析。它配備一個(gè)能同時(shí)放置六塊熒光濾片的機(jī)動(dòng)濾光輪,并具有流變特征,可測(cè)定在0-5 cP范圍內(nèi)的粘度。它還配有高靈敏度的CMOS攝像頭、溫度控制,以及激光塊的選擇。它外形小巧,占地僅為40 cm長(zhǎng)和25 cm寬,適合那些空間有限的實(shí)驗(yàn)室。

 

在談及NS300納米顆粒分析儀時(shí),研究員Petra Hirsova博士談道:“能夠?qū)崟r(shí)地看到、計(jì)數(shù)并測(cè)定顆粒的大小,這相對(duì)于我們使用過的其他技術(shù)已經(jīng)是很大的優(yōu)勢(shì)。與掃描電鏡相比,NTA制備樣品和獲得結(jié)果要更輕松、更快速。與測(cè)定囊泡總蛋白的技術(shù)相比,NTA帶來了細(xì)胞外囊泡的更評(píng)估。”

 

NanoSight是一家私營公司,總部設(shè)在英國。它已在范圍內(nèi)出售了500多臺(tái)儀器,其客戶包括葛蘭素史克、諾華、輝瑞、寶潔、聯(lián)合利華等,以及zui的大學(xué)和研究所。截至目前,NanoSight的技術(shù)已被900多篇第三方文獻(xiàn)引用。在今年9月,NanoSight被思百吉集團(tuán)所收購。

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