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RAW264.7細(xì)胞,RAW264.7說明書

發(fā)布時(shí)間:2015-04-16瀏覽:4678次

RAW264.7細(xì)胞,RAW264.7說明書,小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

細(xì)胞系特征

細(xì)胞株名稱:RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

種屬:小鼠; 雄性

組織來源:白血病

生長(zhǎng)特性:半貼壁

形態(tài)特征:淋巴母細(xì)胞

微生物及支原體檢測(cè):陰性

細(xì)胞背景:此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒,XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。 LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無作用。

安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件:

*培養(yǎng)基:90%DMEM高糖+10%胎牛血清

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法:

收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

(一)如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

()如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

2. 1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。

3. 6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的*次傳代一般是一傳二。

注:1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(45X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們。

凍存方法:


凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO

儲(chǔ)存:液氮儲(chǔ)存

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